Single molecule … matériel unique …

Aujourd’hui, ça y est, je rentre dans le concret des manips, de mes manips contrairement à la dernière fois où je m’étais contenté de regarder les petites bactéries de Katinka et Elen. Pour commencer, et en prévision des vraies manips de demain, une première manip de haut vol : préparer un tampon, le plus simple possible ou presque (10 mM de Tris, 1 mM d’EDTA)

Normalement, à partir d’une solution molaire de Tris et du pot d’EDTA, il faut environ 5 minutes pour prélever 1mL de la solution stock, l’ajouter à 99 mL d’eau distillée et ajouter quelques 30 mg de la poudre blanche …Cette estimation est faite sans compter le fait que maintenant, je travaille dans le monde merveilleux de la molécule unique et que toute contamination de quelque sorte que ce soit doit être évitée à tout prix, ce qui complique un peu l’affaire. En effet, toute la verrerie doit subir au préalable un long traitement afin d’obtenir un lavage le plus efficace possible, à base de plusieurs bains d’acétone, de soude concentrée et d’eau ultrapure, d’étapes de sonication et d’ozonation. Ania, la thésarde polonaise avec qui je fais les manips m’a dit qu’elle a tout prévu.

Tout, enfin presque !.. En effet, le premier problème se pose déjà pour prélever les 99 précieux millilitres d’eau « milliQ ». En effet, il n’y a ni pipette ultrapropre, ni éprouvette ultrapropre, ni fiole jaugée ultrapropre … Qu’à cela ne tienne, on va peser la masse de liquide équivalente. Je dispose donc le flacon (ultrapropre !) sur la balance, le tare et rajoute à la louche (ici, pas besoin de la laver, c’est juste une expression !) 90 mL d’eau. La masse indiquée est alors ---, dommage, le flacon rempli d’eau dépasse la limite de la balance ! [Premier fou-rire commun]. Il va donc falloir faire autrement, avec deux flacons (coup de bol, on en a deux propres !). J’arrive donc à prélever 60 mL d’eau dans l’un, 39 mL d’eau dans l’autre avant de les rassembler dans le même flacon.

Aucune difficulté pour prélever le millilitre de la solution stock, en effet, les cônes sont autoclavés et donc on peut utiliser un classique « pipette-man ».

Là où ça se gâte vraiment, c’est pour peser les 30 mg d’EDTA. En effet, en plus du fait que la masse est très faible, il faut la prélever sans utiliser de papier à peser (sale) et surtout sans utiliser de spatule métallique (métal=particules de poussière=ennemi de la molécule unique !) [Début du deuxième fou rire]. Faut-il en plus faire ça avec des moufles, les yeux fermés ? Ania me propose une tige de verre (ultrapropre) qui n’a rien de contendant et un petit flacon à l’embouchure étroite. A ce stade là, je me rends compte que l’expression « aussi avancé qu’une poule qui aurait trouvé un couteau » existe aussi en polonais !.. Pour m’aider [à arrêter de rire] Ania verse d’un geste leste de la poudre dans le flacon. Verdict : on a environ 20 fois la quantité voulue, sans compter tout ce qui est tombé sur la table. Petit à petit [et entre deux crises d’un rire qui tourne presque aux larmes pour tous les deux], je vide le surplus, en rajoute trop, en réenlève, en rajoute puis (par chance) arrive pile sur la bonne valeur.

A partir de là, il faut vérifier le pH en sachant par avance que l’n ne dispose pas d’acide suffisamment pur (SM-grade et contrairement à ce qu’on pourrait croire, SM signifie ici Single Molecule) pour l’ajuster si le pH n’est pas celui attendu. Heureusement, celui-ci n’est pas trop loin et on peut donc stocker notre précieux tampon au frigo pour demain.

Bilan des courses, presque deux heures de manips, dans la bonne humeur pour faire un tampon qui aurait pu nous prendre 5minutes dans la « vraie vie ». Entre parenthèses, pour la prochaine fois, je vais quand même nettoyer un peu de verrerie (même si c’est très fastidieux) histoire de perdre un peu moins de temps à préparer les prochains tampons.

Bienvenue dans le monde merveilleux de la molécule unique !..